将购买的玉米直接堆放在新盖平房的水泥地面上,开包检查,闻有霉味,发现有的玉米粒表面长有白色绵丝状物;粉碎的剩余玉米也有霉味。
原分离培养
取玉米粒和混合饲料样,0.1%升汞消毒1min,无菌蒸馏水冲洗,然后将样品分别无菌接种于加有抗菌素的卡贝克(czapek)琼脂培养基平皿各5个,另设3个无菌蒸馏水对照培养基平皿,25~28℃培养72h。接样培养基都长有白色绒丝状物,取培养物涂片,乳酸酚棉蓝染色镜检,见有分隔菌丝和孢子,大分生孢子呈镰刀状、中间有2~5个隔,小分生孢子多为卵圆形细胞;而对照培养基平皿均未见类似菌落。
毒素检测
随机抽取玉米样和混合饲料样,玉米赤霉烯酮毒素提取和气相色谱测定参考文献的方法进行。测得玉米样和混合饲料样中玉米赤霉烯酮的含量分别为2.51mg/kg和1.85mg/kg。挑取上述病原分离培养物,以pH8.0的PBS液稀释,用0.3μm滤膜过滤除菌,将少量过滤液接种到长成单层的PK15细胞上,36h后,细胞质浓缩、颗粒化,核浓缩、碎裂、液化,细胞呈中毒样病变;而未接种过滤液的细胞生长正常。根据发病情况、临床症状、实验室检查,初步诊断为镰刀菌引起的猪玉米赤霉烯酮中毒。